جداسازی سلول های بنیادی سرطانی از رده سلولی سرطان پستان انسانی mda-mb-231

از زمان طرح فرضیه سلول بنیادی سرطانی، سرطان به عنوان بیماری در رابطه با سلول بنیادی در نظر گرفته می شود. به سبب برخی مشکلات در جداسازی سلول های بنیادی سرطانی توسط روش های متداولی چون facs و macs ، استفاده از روش کشت های نهادینه همراه با بکارگیری داروهای ضد سرطان پیشنهاد شده است. در تحقیق حاضر از روش کشت نهادینه همراه با داروی وین کریستین با ویژگی مهارکنندگی میتوزی به منظور جداسازی و خالص سازی سلول های بنیادی سرطانی از رده سلولی سرطانی mda-mb231 استفاده شد. در این مطالعه سلول های سرطانی رده mda-mb231 در محیط کشت rpmi1640 و 10 درصد سرم کشت داده شد. جهت تعیین غلظت مناسب داروی وین کریستین ، سلول ها با غلظت های 0 ،2 ، 4 ، 6 و 8 نانوگرم بر میلی لیتر دارو تیمار شدند. تعیین هویت سلول ها با بررسی بیان ژن های oct4 ، nanog ، sox2 و nucleostemin به روش rt-pcr انجام شد. درصد mfu پس از قرارگیری سلول ها در کشت غیرچسبنده حاوی egf ، bfgf ، lif ، b27 ، هورمون انسولین و bsa محاسبه شد. همچنین بیان مارکر cd44 برای mammosphere های شکل گرفته سنجیده شد. نتایج بدست آمده نشان داد بکارگیری وین کریستین با غلظت 4 نانوگرم بر میلی لیتر پس از 72 ساعت با حذف 34/80 درصد سلول ها غلظت دارویی مناسب است. همچنین سلول ها پس از تیمار با غلظت 4 نانوگرم بر میلی لیتر وین کریستین هرچهار ژن مورد بررسی را بیان کردند. نتایج حاصل از کشت غیرچسبنده و بررسی درصد mfu بین سلول ها پس از تیمار دارویی و بدون تیمار دارویی نشان داد که این میزان تشکیل mfu در سلول ها پس از تیمار به طور معنی داری بالا بود (p<0.05). همچنین mammosphere های حاصل از کشت غیرچسبنده مارکر cd44 را بیان کردند. به طور کلی می توان نتیجه گرفت استفاده از کشت نهادینه همراه با داروهای ضد سرطان می تواند به عنوان روشی مناسب و در دسترسی برای جداسازی سلول های بنیادی سرطانی در شرایط آزمایشگاهی معرفی شود.